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淺析ELISA試劑盒中陰性本底的形成原因

更新時間:2021-11-05      瀏覽次數(shù):914
  今天我們就談ELISA中陰性本底的形成原因。酶聯(lián)固相免疫實驗中,尤其在簡介ELISA法中,經(jīng)常會碰到陰性本底的問題。主要是本底過高和不同標本的本底值差異較大。本底或稱背景,是ELISA中的非特異性顯色。底物未經(jīng)過酶作用而呈現(xiàn)的顏色稱為空白。底物液如配制不當會出現(xiàn)一定的空白值。這個空白值只要不太高(A<0.05),可從個測定值中減除,并不影響實驗結(jié)果。這里研究的是不含待測抗原或抗體的陰性標本在ELISA中出現(xiàn)的本底。從理論上講,只有陽性標本z終才能引出顯色反應,在以下情況。
 
  ELISA試劑盒在酶免疫測定中,ELISA的特點是利用固相載體作為分離游離和結(jié)合的酶結(jié)合物的手段。固相載體與吸附在其上的抗原會抗體形成固相抗原或固相抗體,即免疫吸附劑。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團,通過疏水鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合。之中吸附式物理性的非特異性吸附,雖然蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等對吸附的量有一定的影響,但總的來說各種蛋白質(zhì)均能吸附在聚苯乙烯載體的表面。因此除在包被時有目的地使抗原或抗體吸附在載體上,在ELISA各個步驟中均有可能發(fā)生干擾物質(zhì)的吸附,使z終產(chǎn)生與受檢抗原-抗體反應無關(guān)的顯色,這是形成本底的主要原因。
 
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